세포배양모델

활용범위 및 실험 기법

• 1 일차배양 신경세포, 성상세포, 마이크로글리아, neuroprogenitor cells
• 2 Brain slice culture model
• 3 세포주: HT22, HN3, Neuro2A, N27, SH-SY5Y, PC12, C6 glioma, BV-2, bEnd.3 cell

신경세포 보호작용

활용범위 및 실험 기법

• 1 In vivo
  • Hematoxylin & Eosin staining, Cresyl violet 염색
  • TUNEL 염색법, Fluoro Jade B 염색
  • TTC 염색
  • Immunohisto(cyto)chemistry
• 2 in vitro
  • LDH 측정, MTT 분석, PI 염색, calcein AM
• 3 신경보호인자 생성: BDNF, NT, GDNF등의 생성 및 발현 (Western blot)

신경염증반응

활용범위 및 실험 기법

• 1 ROS 관련
  • ROS 측정: DCFH2-DA, DHE, Rhodamine123, TMRE
  • 4-HNE, MDA, Peroxiredoxin등의 발현변화
  • 항산화물질의 변동: GSH, SOD, NADPH Oxidase, HO-1발현변화
  • Western blot, RT-PCR, Enzyme activity assay (ELISA)
• 2 염증성매개인자의 발현
  • 염증성 Cytokines 발현: iL-1beta, IL-6, IL-18, TNFalpha, TGFbeta 등
  • COX-2, PGs발현, iNOS, NO 발현 및 분비
  • mmps, tPA/PAI-1 발현 및 효소활성
  • Western blot, RT-PCR, Zymography, ELISA

분자생물학적 접근

활용범위 및 실험 기법

• 1 유전자 발현 변동: RT-PCR, Microarray, PCR-Array, ChIP assay
• 2 Gene knockdown by Transient transfection: siRNA, shRNA transfection
• 3 Gene Overexpression

교세포 활성화측정

활용범위 및 실험 기법

• 1 GFAP, NG2, Iba-1, OX-6, MBP, Ki-67 염색
• 2 migration assay : migration chamber 사용, Co-culture system (transwell 사용)
• 3 phagocytosis: phagocytotic receptor 발현 변화 (Western blot), phagocytosis 측정

신경가소성 및
synaptogenesis 측정

활용범위 및 실험 기법

• 1 NCAM, BDNF, tPA, PAI-1, MMPs 분비와 발현 변화확인 (Western blot, RT-PCR, ELISA, Zymography)
• 2 PSD95, Synaptophysin 염색 및 발현 양 비교 (Immunohistochemistry, Western blot)
• 3 nNOS 발현 및 활성
• 4 시냅스 분석: EM 분석, Synaptosomal fraction 에 의한 Western blot
• 5 시냅스 모양: EM 사진 분석

신경줄기세포의 증식 및 분화

활용범위 및 실험 기법

• 1 증식: MTT 분석, 면역 염색법 (Ki-67, BrdU, Nestin, doublecortin)
• 2 분화: NeuN, Tuj-1, Nestin, GFAP등을 이용한 면역염색 및 Western blot
• 3 NCAM, BDNF, tPA, PAI-1, MMPs 분비와 발현 변화확인 (Western blot, RT-PCR, ELISA, Zymography)
• 4 Live cell imaging
• 5 Neurite outgrowth 측정: Immunostaining을 통해 neurite 숫자, neurite 길이 측정

신호전달관련 분석

활용범위 및 실험 기법

• 1 염증 및 세포 사멸관련 신호전달기전
  • Src, Fyn, Syk, calcineurin, TLR2,4, JAK, STAT, MAPKs, PKC, PKA, PKG, iNOS, mTOR, s6k1, AMPK, GSK3beta, PI3K, Akt, NF-kB, IkB, AP1, SP1, Nrf2/Keap1, FOXO, PARs, 등
• 2 시냅스, 신경세포재생 및 인지기능 관련
  • PI3K/Akt, MAPKs, BDNF, GDNF, eNOS, nNOS, c-fos, ARC, CREB, CAMKII, Casein kinase, aurora kinase

신경전달물질변동

활용범위 및 실험 기법

• 1 Voltametry 활용 신경전달물질변동 측정
• 2 Functional reuptake assay (NET, SERT, DAT)

미토콘드리아 기능 조절

활용범위 및 실험 기법

• 1 OCR: Seahorse XF Cell Mito Stress Analyzer system
• 2 형태적변화: Fusion, Fission변화, ICC, EM
• 3 ROS: mitoSOX, Mitotracker 활용 이미징

Ca2+ Imaging

활용범위 및 실험 기법

• 1 Ca2+ imaging: Fura2, 4 AM, (excitation 350/380 nm and emission 505/520 nm)을 이용한 세포내 Ca2+ level 변화
• 2 Oregon Green BAPTA-1
• 3 ELISA, Immunofluorescence

Epigenetic modulation

활용범위 및 실험 기법

• 1 DNA methylation : DNA methyltransferases ((DNMT1/3a/3b, MeCP2)
• 2 Histone acetylation: Histone acetyltransferase (HATs), Histone deacetylase (HDACs)
• 3 Histone methyltransferases (HMTs), histone demethylases, and histone kinases
• 4 Western blot, RT-PCR 통한 각 enzymes의 발현변화
• 5 HDAC activity assay
• 6 DNA methylation assay (ChiP assay)

혈뇌장벽의 증식 분화관련
신호전달

활용범위 및 실험 기법

• 1 Astrocyte activation
• 2 MMP9 expression and activity
• 3 TIMP expression
• 4 Micro-vascular inflammation
• 5 BBB disruption
• 6 Synaptic dysfunction: synapse

신규타겟발굴

활용범위 및 실험 기법

• 1 RNA sequencing, PCR array, Epigenome analysis, Real time-PCR